(2) 成箱購買市售品牌純凈水,如500ml 一支的怡寶或娃哈哈,這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下細(xì)菌平板實(shí)驗(yàn),待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨(dú)開一支即可,也很方便。每次成本2 元左右。這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié):在絕大多數(shù)書本上,凡談到配制流動相都會談到最后有一個(gè)過濾的步驟。但是從我們長期使用的實(shí)際效果來說,只要能保證水的質(zhì)量,這一步完全可以也應(yīng)當(dāng)去除。原因有以下三點(diǎn):(1) 流動相過濾在理論上有好處,但是實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專瓶專用,反而容易造成的交叉污染,對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。(2) 流動相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000 多元,且過濾器公認(rèn)是比較容易損壞的設(shè)備。最主要是過濾片的成本太高,一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算,過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。(3) 流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個(gè)預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗,晾干的過程,至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。(4) 在實(shí)際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時(shí)間沒有做過流動相過濾的工作,但是和國內(nèi)同行相比較,在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長的。
“堵”的原因之二:使用流動相時(shí)的細(xì)菌污染。
指的是:流動相剛開始沒有長菌,在使用時(shí)卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習(xí)慣造成的。舉最簡單的例子:50%的甲醇水流動相,有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起,另一種方式是在流路A 放純甲醇,流路B 放純水。從單純實(shí)驗(yàn)效果來說,后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn):首先是簡單,不需要實(shí)驗(yàn)者另個(gè)計(jì)算配比混合,其次就是比例準(zhǔn)確,能得到保留時(shí)間重復(fù)性極好的實(shí)驗(yàn)效果。]但是,它有一個(gè)致命的缺陷,就是純水在流動相瓶中幾天時(shí)間就會長細(xì)菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,而是用緩沖鹽溶液,本身就是優(yōu)質(zhì)肥料,細(xì)菌長得更迅速),一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗(yàn)都要用新制備的純水,更要求在每次實(shí)驗(yàn)后把水相換掉,換成甲醇沖洗干凈,這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識不強(qiáng),就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏,但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因?yàn)橐合嗌V柱的堵塞是不可逆的。所以,寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復(fù)性,也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實(shí)際實(shí)驗(yàn)效果來說,我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細(xì)菌總數(shù)實(shí)驗(yàn),在5%就基本可以抑菌,在10%及以上就可以完全殺菌了),這樣可以有效排除長細(xì)菌的隱患,既可作流動相,也可沖柱。就算是在配制流動相時(shí)會計(jì)算得麻煩一些,但是一次麻煩,終身受益。
“堵”的原因之三:不適當(dāng)操作。
常見問題的有以下幾種:
(1) 在更換零件時(shí)選擇的型號有誤,接口不是很匹配,在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。